Extraction d’ADN à partir de sang humain par trois méthodes différentes

Abstract

Le but de ce travail est d’isoler l’ADN à partir du sang humain. Nous avons procédé à l’extraction de ce dernier selon 3 méthodes : La méthode phénol/chloroforme, Salting out et les kits commercialisés. Pour cela, la collection du sang était réalisée dans des tubes EDTA (pour éviter la coagulation du sang). Pour réaliser l'extraction de l'ADN par la méthode phénol/chloroforme, les principales étapes étaient la lyse des globules rouges, lyse des globules blancs, l'extraction au phénol, l'extraction au chloroforme et précipitation de l'ADN. Pour la méthode salting out, les étapes sont les mêmes que celles de phénol/chloroforme (sans l’utilisation de phénol ou de chloroforme). L’utilisation du kit QIAamp DSP DNA Blood Min ne nécessite pas la séparation des leucocytes au préalable. Les procédures n’impliquent pas d’extraction au phénol/chloroforme ni de précipitation par l’éthanol. Aussi, la préparation des échantillons à l'aide du QIAcube suit les mêmes étapes que la procédure manuelle (c'est-à-dire lyser, lier, laver et éluer). Les méthodes d’extraction d’ADN doivent être validées afin de générer un ADN pur de bonne qualité et de quantité suffisante pour établir un profil génétique interprétable. À la fin, deux critères ont été évalués, la quantité d’ADN et le degré de son pureté.